分子实验入门
PCR引物设计与体外检查：从模板版本到退火梯度
用一段无害教学DNA完成候选引物设计、特异性检查、配液与三温度PCR验证。
设计1–2小时，验证约2小时
从第一次配液，到独立完成实验
实验怎么做？
从这一步开始。
用量配清楚，时间写明白，操作拆成每一步。
细胞、分子、动物实验，还有图解与实用文档。
YOUR FIRST EXPERIMENT先知道加多少，
先知道加多少，
再知道下一步做什么。
01核对体系02照表配液03逐步操作04检查结果
每篇都从适用条件开始，配套用量、时间和记录。
全部实验方法
141 篇指南分子实验进阶
PCR污染定位：分区、试剂替换与擦拭对照
用10管无害教学PCR定位试剂或台面污染，以可追溯对照决定是否恢复实验。
约3小时
分子实验进阶
酚氯仿PCR纯化：100 μL教学产物的去蛋白与浓缩
以明确pH的酚氯仿抽提与乙醇沉淀处理PCR产物，区分去蛋白与选择性去引物。
约2小时
分子实验入门
大肠杆菌菌落PCR：八个K-12克隆的插入筛查
先复制保种再取少量菌作模板，使用空载体、阳性克隆和NTC解释插入大小。
约2.5小时，保种培养另过夜
分子实验进阶
反向PCR：教学DNA限制片段的稀释自连接与接头验证
在已知无害教学DNA上演练限制片段环化、背向引物扩增和接头测序。
约1天
分子实验进阶
酿酒酵母菌落PCR：NaOH热裂解后筛查教学位点
对BSL1酿酒酵母单菌落先保种，再做碱热裂解和有对照的PCR；区分裂解失败与靶标阴性。
约3小时
分子实验进阶
重叠延伸SOE-PCR：600与800 bp教学片段融合
通过24 bp重叠区、等摩尔模板、无引物延伸和外侧引物扩增获得1376 bp融合片段。
约5–6小时
分子实验进阶
PCR-SSCP构象筛查：150 bp教学片段的非放射性PAGE
以已测序等长教学变体和参考片段，在两种甘油条件下比较单链构象，使用SYBR Gold显影。
约1天
分子实验进阶
传统碱裂解质粒小提：1.5 mL菌液的无柱路线
用100/200/150 μL三液体系中和裂解，再经RNase、酚氯仿与醇沉淀回收质粒。
约2小时，培养另过夜
分子实验进阶
加A尾与TA克隆：1 kb教学平端DNA接入pGEM-T
先以普通Taq补加3′A，再在指定T载体体系中连接、转化、筛查并测序。
操作约4小时，加培养与测序2–3天
分子实验进阶
双酶切定向亚克隆：EcoRI/HindIII的1 kb教学插入
从已知供体和受体图谱出发，完成双酶切、片段分离、定量连接及有对照的克隆验证。
操作约6小时，加培养与测序2–3天
分子实验入门
大肠杆菌化学感受态制备与热激转化：50 mL DH5α教学批次
从对数期培养、低温CaCl₂处理到带阴阳性对照的热激转化和效率计算。
约2天