分子实验入门
移液与梯度稀释：配出可追溯的六级 NaCl 梯度
以现成 10 mM NaCl 水溶液为母液，完成 10 倍连续稀释、直接稀释及移液称重练习，每管体积和浓度都有核对表。
45–60 分钟
从第一次配液，到独立完成实验
实验怎么做？
从这一步开始。
用量配清楚，时间写明白，操作拆成每一步。
细胞、分子、动物实验，还有图解与实用文档。
YOUR FIRST EXPERIMENT先知道加多少，
先知道加多少，
再知道下一步做什么。
01核对体系02照表配液03逐步操作04检查结果
每篇都从适用条件开始，配套用量、时间和记录。
分子实验
73 篇指南分子实验入门
DNA 琼脂糖电泳：50 mL 的 1% TAE 胶逐步操作
固定为普通 0.5–3 kb PCR 产物、1% 琼脂糖胶、1×TAE 和 EtBr 后染，写清配胶、6×上样液、方向、电场和终止条件。
约 2 小时
分子实验入门
常规 PCR：50 μL 分开组分 Taq 体系与阴性对照
采用 Addgene 的普通 Taq 分组分配方，以已验证的约 1 kb 非感染性教学 DNA 为模板，完成四管反应、程序设置和电泳验证。
PCR 约 2 小时；连同电泳约 3–4 小时
分子实验入门
RNA 提取与质控：GeneJET 培养细胞柱法完整示例
从约 100 万 NIH/3T3 培养细胞沉淀开始，按 GeneJET K0731 的裂解、结合、三次洗柱和洗脱步骤操作，并给出去 DNA 与质控记录。
提取约 45–60 分钟；含去 DNA、清理及质控约 2 小时
分子实验入门
逆转录合成 cDNA：High-Capacity 20 μL 体系逐管配制
固定使用含 RNase inhibitor 的 High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit，500 ng RNA 输入，按官方 25/37/85°C 程序制备 cDNA 和匹配 No-RT。
约 2 小时 45 分钟，另加后续 qPCR 检查
分子实验入门
RT-qPCR 相对定量：Power SYBR 20 μL 体系与 ΔΔCq 算例
以小鼠细胞 cDNA 为例，在标准模式 ABI 7500 上完成板图、20 μL 加样、熔解曲线、效率检查及相对表达计算，逐项处理 NTC 和 No-RT。
约 3 小时；首次引物效率验证另需一轮实验
分子实验入门
Western blot：NIH/3T3 的 β-actin 湿转教学流程
固定为约 42 kDa β-actin、10% 小胶、0.45 μm 硝酸纤维素膜和冷却湿转，写清裂解定量、上样、膜方向、抗体稀释及曝光检查。
第1天约5–6小时并4°C过夜；第2天约2小时
分子实验入门
BCA 蛋白定量：25 μL 微孔板法与标准曲线
使用 Pierce BCA #23225，逐步配制标准、工作液和稀释样本，避免还原剂干扰及超范围外推。
约60分钟
分子实验入门
SDS-PAGE：10%预制小胶分离普通细胞蛋白
用现成Tris-glycine胶避免自配丙烯酰胺，明确蛋白量、还原上样液、运行缓冲液和考马斯染色终点。
约4–5小时
分子实验入门
PCR产物柱纯化：GeneJET K0701 的50 μL示例
以约1 kb单一非感染性PCR产物为例，完成等体积结合、洗涤、干柱和洗脱，核对回收量而非只看浓度。
纯化约15分钟；含验证约1–1.5小时
分子实验需培训
质粒小提：K-12 DH5α携带pUC19的GeneJET流程
从3 mL非致病K-12教学菌培养物提取普通pUC19质粒，控制碱裂解时间、避免染色体污染并验证身份。
培养12–16小时；提取约45分钟
分子实验进阶
琼脂糖切胶回收：100 mg胶块的GeneJET示例
从非感染性约1 kb线性DNA条带切取100 mg胶块，按胶重配结合液，写清溶胶、洗柱和后续验证。
回收约30分钟；含验证约1–1.5小时，不含前序跑胶