细胞实验入门
新手带教|Annexin V/PI 流式检测细胞凋亡
从回收漂浮细胞、配含钙结合液,到流式补偿、象限判读和凋亡率计算,逐项带你完成。
约2–3小时;不含前期处理
从第一次配液,到独立完成实验
用量配清楚,时间写明白,操作拆成每一步。
细胞、分子、动物实验,还有图解与实用文档。
每篇都从适用条件开始,配套用量、时间和记录。
从回收漂浮细胞、配含钙结合液,到流式补偿、象限判读和凋亡率计算,逐项带你完成。
学习温和固定、去乙醇、线性DNA采集、排除双联体,以及G1/S/G2-M直方图的正确读法。
以约100万贴壁细胞为例,按相分离、RNA沉淀、乙醇洗涤和重溶逐步操作并防RNase污染。
学会用RNA HS荧光定量、理解UV纯度比值与完整性读数,并决定样本能否进入RT。
按20 μL体系逐管配制RT与No-RT对照,正确编程25/37/85°C并计算cDNA等效输入。
指定Power SYBR标准体系,手把手规划96孔板、配置20 μL反应、设定ABI 7500并检查熔解曲线。
逐管配五点四倍系列稀释,布置复孔与NTC,手算斜率、扩增效率和R²的含义及局限。
从基线、阈值、技术复孔到ΔCq/ΔΔCq逐步计算,并识别参考基因不稳及伪重复。