细胞实验需培训
PI 细胞周期：70%乙醇固定、RNase染色和单细胞门
固定Invitrogen FxCycle F10797体系，每份约100万细胞用500µL即用PI/RNase液，区分DNA倍量与真正周期变化。
收集约30分钟；−20°C固定至少2小时；染色30分钟
从第一次配液，到独立完成实验
实验怎么做？
从这一步开始。
用量配清楚，时间写明白，操作拆成每一步。
细胞、分子、动物实验，还有图解与实用文档。
YOUR FIRST EXPERIMENT先知道加多少，
先知道加多少，
再知道下一步做什么。
01核对体系02照表配液03逐步操作04检查结果
每篇都从适用条件开始，配套用量、时间和记录。
全部实验方法
141 篇指南细胞实验进阶
EdU 增殖成像：10µM脉冲、Click反应与阳性核计数
使用Invitrogen Click-iT C10337，说明10mM母液、20µM双倍工作液、Click混合次序及EdU阳性核比例。
铺板过夜；EdU脉冲2小时；固定染色约2小时
细胞实验进阶
克隆形成实验：每孔200个单细胞到铺板效率和存活分数
以HeLa六孔板200细胞/2mL为候选，写出两级稀释、换液、≥50细胞集落规则与PE/SF计算。
铺板约45分钟；培养约10–14天；固定计数约1小时
细胞实验入门
Calcein-AM/PI 活死染色：300µL悬液双染与逐细胞计数
固定Dojindo CS01双染试剂，用200µL细胞加100µL染液，给出真实染液加和、阴阳性对照与活细胞比例。
收集洗涤约30分钟；37°C染15分钟；立即成像
细胞实验进阶
JC-1 线粒体膜电位：2µM染色与红绿比值
固定Dojindo MT09，用2mM母液配2µM工作液，说明相同曝光、CCCP控制及去极化后不再洗涤。
铺板过夜；染色30分钟；去极化控制约20分钟；立即成像
细胞实验进阶
DCFH-DA 类细胞ROS：探针加载、过氧化氢控制与归一化
固定Dojindo R252改进DCFH-DA体系，明确1:1000加载、黑板100µL体系、100µM H₂O₂控制与活细胞量校正。
铺板约24小时；加载30分钟；控制处理30分钟；立即读数
细胞实验进阶
低黏附三维肿瘤球：2000细胞/孔与半量换液
使用Corning4515圆底低黏附板，给出2000细胞/100µL候选、150×g聚集、50µL半换液及球形态记录。
接种约30分钟；聚集观察24–72小时；培养至第7天
细胞实验进阶
细胞黏附实验：纤连蛋白包被与60分钟洗后保留量
固定Corning356008纤连蛋白，96孔板每孔0.5µg包被，比较洗后黏附细胞及相对保留量。
包被1小时；封闭30分钟；黏附60分钟；固定染色约1小时
细胞实验进阶
SA-β-gal 衰老染色：IMR-90、pH6.0与无CO₂显色
固定ATCC IMR-90与CST9860，配1mL含1mg/mL X-gal的显色液，37°C无CO₂过夜并统计蓝色细胞。
若做应激候选先处理2小时并恢复5天；固定15分钟；显色过夜
细胞实验进阶
Caspase-3/7 活性：白板等体积发光法与背景扣除
固定Promega G8091与白色96孔板，100µL样本加100µL试剂，给出阳性候选、1小时读数和细胞数校正。
铺板过夜；阳性候选4小时；室温平衡约30分钟；反应1小时
分子实验入门
BCA 蛋白定量：25 μL 微孔板法与标准曲线
使用 Pierce BCA #23225，逐步配制标准、工作液和稀释样本，避免还原剂干扰及超范围外推。
约60分钟
分子实验入门
SDS-PAGE：10%预制小胶分离普通细胞蛋白
用现成Tris-glycine胶避免自配丙烯酰胺，明确蛋白量、还原上样液、运行缓冲液和考马斯染色终点。
约4–5小时