分子实验入门
RT-qPCR 相对定量：Power SYBR 20 μL 体系与 ΔΔCq 算例
以小鼠细胞 cDNA 为例，在标准模式 ABI 7500 上完成板图、20 μL 加样、熔解曲线、效率检查及相对表达计算，逐项处理 NTC 和 No-RT。
约 3 小时；首次引物效率验证另需一轮实验
从第一次配液，到独立完成实验
实验怎么做？
从这一步开始。
用量配清楚，时间写明白，操作拆成每一步。
细胞、分子、动物实验，还有图解与实用文档。
YOUR FIRST EXPERIMENT先知道加多少，
先知道加多少，
再知道下一步做什么。
01核对体系02照表配液03逐步操作04检查结果
每篇都从适用条件开始，配套用量、时间和记录。
全部实验方法
141 篇指南分子实验入门
Western blot：NIH/3T3 的 β-actin 湿转教学流程
固定为约 42 kDa β-actin、10% 小胶、0.45 μm 硝酸纤维素膜和冷却湿转，写清裂解定量、上样、膜方向、抗体稀释及曝光检查。
第1天约5–6小时并4°C过夜；第2天约2小时
动物实验入门
动物实验开始前：从研究问题到开工核对表
按倒排时间准备伦理、3R、人员、福利和记录文件；把“已经审批”变成每个执行者都能核对的开工清单。
文书核对示例约 2 小时；审批与培训另行安排
动物实验入门
动物随机分组：用固定种子生成可核对的分配表
从实验单位、冻结名单到区组随机和分配隐藏，使用 12 个虚拟编号完成一次能复现的分组练习。
纸面练习约 45–60 分钟；现场核对按数量安排
动物实验入门
动物实验盲法：建立编码、锁表和可追溯的解盲流程
为观察、视频评分和分析建立分工、标签与密钥；遇到误暴露和福利紧急情况时留下能复核的记录。
建立流程示例约 60 分钟；正式执行贯穿全程
动物实验需培训
小鼠适应与温和转移：从笼边观察到隧道操作记录
在培训人员监督下分阶段练习隧道转移，固定环境、逐次记录反应，并清楚区分环境适应与操作习惯化。
纸面准备约 30 分钟；逐日练习按设施批准计划
动物实验入门
动物体重与一般状态：逐只核验、去皮称量与连续记录
以健康成年小鼠的称量演练为例，从天平检查到即时记录和异常复核，建立不依赖记忆的福利监测流程。
开工准备示例 10 分钟；每只预留约 1–2 分钟
动物实验需培训
旷场行为观察：固定一套参数，保留视频与质控证据
用明确的教学参数演示房间、装置、顺序、标定和视频检查，区分活动读数、跟踪错误与行为解释。
当日准备示例约 40 分钟；每只录像 10 分钟另加周转
动物实验入门
动物样本编号与交接：先演练，再建立一管一位置的台账
用唯一 ID、父子关系和双人交接连接动物、样本、保存历史和分析文件；本页不讲任何取材步骤。
建表与空管演练示例约 60 分钟；交接时逐管核对
细胞实验进阶
肿瘤细胞 Transwell 迁移：8 µm 小室从接种到膜下计数
固定HeLa CCL-2与Corning 3422，明确上下室100/600 µL、每室5万活细胞及固定染色和膜下计数。
准备约1小时；迁移候选窗口24小时；染色计数约1小时
细胞实验进阶
Matrigel Transwell 侵袭：包胶与无胶配对怎样做
以Corning354234基质胶和3422小室为例，示范每膜30µg包被、批次浓度换算及无胶迁移配对。
前夜4°C融胶；包被约1小时；跨胶观察候选24小时
细胞实验需培训
Annexin V/PI 凋亡流式：漂浮细胞、单染补偿和四象限
固定Invitrogen V13241 Alexa Fluor488/PI体系，配1×结合液与100µg/mL PI，完整回收漂浮及贴壁细胞。
收集约30分钟；染色15分钟；当天尽快上机