旷场行为观察：固定一套参数，保留视频与质控证据

02实验原理

旷场记录动物在新环境中的位置与活动，可得到移动距离、速度、中心区停留等指标。指标同时受运动能力、光照、应激、品系、性别和昼夜节律影响，单独一个中心区指标不能等同临床焦虑诊断。

04材料与仪器

• 经检查的旷场装置、安全转移器具、已获授权的执行人员。
• 固定相机、可靠存储、照度计、标定尺、温湿度记录工具。
• 视频跟踪软件、完整参数导出功能、中性文件 ID 与随机/平衡顺序表。
• 获批福利暂停条件、清洁方法及兽医联络方式。

05配液与用量

本篇不配液；装置清洁剂、浓度、接触与干燥时间依设施验证方案填写，不随意选择会残留强烈气味的产品。

06时间安排

07开始前的准备

先指定一个主要指标，例如本例选择全程移动距离；中心区停留等作为次要指标，并固定“轨迹重心在边界上如何归属”。设备无动物试录至少覆盖计划时长，确认掉帧、存储与时间戳。用标定尺核对画面实际比例，不把视频像素当厘米。把室内等待、起始位置、操作者位置、清洁方式及日内窗口写入一页参数表；实际数值偏离必须记录，不能改原表掩盖。

08逐步操作

1. 核对动物 ID、健康状态、前期适应和近期操作，排除资格按预设规则决定。异常福利征象优先处理，不为凑齐样本安排测试。
2. 检查装置底面、围壁与防逃措施，移走无关物，确认相机固定、全底面可见、无人员影子或显著反光。
3. 在相机不变位置下放标定尺设定尺度，保存标定画面；定义有效场区和中心区坐标。移走标定物后检查画面，不在放入动物后再移动相机。
4. 测底面中心及四角照度，记录温度、湿度、时间、光照周期与背景噪声事件。教学目标 50 lx 不表示偏离多少可以接受，容许范围应在项目中事先确认。
5. 用无动物试录核对帧率、计时和保存路径；使用既有合规测试视频检查跟踪参数。预设阈值、平滑和静止判定规则，保留软件版本与配置。
6. 按预先随机或平衡的顺序取动物，确保组别不会与上午/下午完全重合。按获批时长完成测试房适应，记录实际进入与开始时间。
7. 由培训合格者用一致的温和方式转移，将动物放至预设起点；本例为靠边固定位置并朝向场内，真实位置须与研究方案一致。使用统一事件标记定义录像分析起点。
8. 连续录满本例 10 分钟；操作者保持预定位置并按福利方案监看，避免交谈、开门和无必要靠近。出现异常时按获批规则终止，保存实际时长与全片，不补录成看似完整的一次。
9. 结束后安全回笼、核对身份与状态，按设施认可方法清洁，满足产品接触时间并完全干燥后再测下一只；记录任何残留气味、湿面或清洁偏离。
10. 以中性 ID 保存原视频，核对文件可播放、起止与动物表一致，建立只读备份。分析者不要从文件夹名或笼卡画面看到处理身份。
11. 在盲态下核对原视频与轨迹：检查全片，并重点查看反光、贴壁、静止、跳跃和丢失段。抽看起中末只能作快速检查，不能保证全程无误；可用异常轨迹提示定位复核。
12. 依预设质控规则处理丢帧、丢失或跟踪跳变，保留原轨迹、修改参数与重跑版本。按真实实验单位汇总，不把每一帧或多个时间箱当成独立动物。

09结果判断与质控

应输出原视频、比例标定、区域定义、环境/顺序表、轨迹和每只动物的质控结论。全程距离可按连续位置增量求和；中心停留需报告分析有效时长及分母。移动减少可能来自运动受限、环境、冻结或其他因素；中心区停留不能单独证明临床焦虑，也不能用一个指标替代整体行为与福利评估。

10实验记录模板

11常见问题与排错

轨迹突然穿过围壁或速度极高

核对场区、比例、反光及跟踪对象是否误选；回看对应原片，在同一预设规则下修正，不能直接删掉最高速度点。

黑毛或白毛动物难识别

在预实验优化地面与照明对比，避免阴影；正式改变背景或软件阈值时记录版本，并评估批次影响。

某一组都在最后测

这是顺序与处理混杂，不能靠重命名视频解决；记录限制，后续按预定随机/平衡方案安排，不能重测到结果满意。

相同动物再测能当首次探索吗

重复暴露可产生习惯化；是否重测和间隔须预先设计、获批并报告，不能把补录默认为独立首次观察。

12参考资料

• ARRIVE 2.0：Experimental procedures：报告程序的时间、环境与具体条件。
• ARRIVE 2.0：Outcome measures：明确测量和主要结局。
• NC3Rs：Mouse handling：转移方式会影响行为结果。
• 本机构批准的旷场 SOP、追踪软件说明与预实验验证；40×40 cm、50 lx、10 分钟等是本页教学参数，并非上述来源的统一推荐。