细胞实验进阶
DIG-LNA固定切片RNA原位杂交：显色与竞争对照
以已取得的固定冷冻切片检测短RNA，记录空间定位及特异性控制。
约3天
从第一次配液，到独立完成实验
实验怎么做？
从这一步开始。
用量配清楚，时间写明白，操作拆成每一步。
细胞、分子、动物实验，还有图解与实用文档。
YOUR FIRST EXPERIMENT先知道加多少，
先知道加多少，
再知道下一步做什么。
01核对体系02照表配液03逐步操作04检查结果
每篇都从适用条件开始，配套用量、时间和记录。
全部实验方法
141 篇指南细胞实验进阶
固定染色体FISH：直接荧光探针与常规玻片路线
使用已制备中期分裂相玻片，完成变性、杂交和匹配对照判读。
约2天
分子实验进阶
LexA酵母双杂交定向验证：自激活排查与双报告判读
从已验证转化株开始，以四种配对、诱导对照和独立克隆确认候选互作。
约1周
细胞实验入门
非病毒质粒脂质体转染：24孔板双剂量优化
以无支原体的NIH/3T3普通培养细胞及已测序的非病毒GFP教学质粒为例，24孔板每孔0.5 mL培养液；两档脂质体各做2孔，并设未处理及无DNA脂质体对照各2孔，共8孔。
3天
细胞实验进阶
G418杀灭曲线与非病毒稳定细胞池筛选
以NIH/3T3及已经转染48–72小时、携带neo抗性和GFP的非病毒教学质粒细胞为样本。
约4–6周
分子实验入门
非致病大肠杆菌重组蛋白表达：10 mL诱导对照试验
使用已测序确认、携带pET-kan型非病毒His-GFP教学质粒的非致病BL21(DE3)，每个诱导和未诱导培养各10 mL。
2天
分子实验进阶
His标签Ni-NTA纯化：0.5 mL树脂的原生条件分级回收
从非致病BL21(DE3)表达的无害His-GFP澄清裂解液5 mL开始，目标蛋白估计不超过0.5 mg，使用0.5 mL沉降体积Ni-NTA琼脂糖及重力柱。
约3小时
分子实验进阶
包涵体溶解与小规模稀释复性：His-GFP条件筛查
用指导者已从无害His-GFP表达菌制得并洗过的包涵体沉淀10 mg湿重开展小试。
约2天
分子实验入门
硫酸铵分级沉淀：10 mL教学蛋白液的0–30%与30–60%分段
以指导者提供的10 mL非感染性教学蛋白混合液为样本，基液50 mM Tris-HCl pH7.5，无硫酸铵，蛋白总浓度约1–5 mg/mL。
约3小时另加透析
分子实验入门
蛋白透析换液：1 mL可溶蛋白的三次外液置换
1.00 mL、约1 mg/mL的可溶His-GFP（约27 kDa），原液含250 mM咪唑、50 mM Tris和300 mM NaCl。
约18小时
分子实验入门
超滤浓缩与回收核验：4 mL GFP浓缩至0.5 mL
4.00 mL无害纯化GFP，0.20 mg/mL，在20 mM Tris-HCl pH8.0、150 mM NaCl中；用4 mL容量、10 kDa MWCO再生纤维素离心超滤器和摆桶转子浓缩至约0.50 mL。
约1小时
分子实验入门
蛋白胶点切取与质谱交接：角蛋白污染控制
从一块已完成考马斯染色并用水脱色的1 mm厚SDS-PAGE/二维胶开始，选择3个清晰蛋白点或条带，以及1个等面积无蛋白背景胶块；样本来自无害教学蛋白。
约45分钟