手灌SDS-PAGE胶:10%分离胶与4%积层胶
为1 mm厚、约8×7 cm迷你垂直电泳板手灌一块10%分离胶及4%积层胶,分别配5 mL与2 mL(含余量);以无害教学蛋白和分子量标准验证成胶及泳道。
从第一次配液,到独立完成实验
用量配清楚,时间写明白,操作拆成每一步。
细胞、分子、动物实验,还有图解与实用文档。
每篇都从适用条件开始,配套用量、时间和记录。
为1 mm厚、约8×7 cm迷你垂直电泳板手灌一块10%分离胶及4%积层胶,分别配5 mL与2 mL(含余量);以无害教学蛋白和分子量标准验证成胶及泳道。
从已去盐、已定量且无颗粒的木豆叶教学蛋白提取物50 μg开始,使用7 cm、pH4–7的IPG胶条及兼容PROTEAN i12聚焦装置,二向为12%迷你SDS-PAGE。
以健康NIH/3T3细胞作无药物教学示范,96孔板每孔100 μL培养液,0、2500、5000、10000、20000细胞/孔各3孔,共15孔。
从已购买并建立培养的正常商业HUVEC、约80%融合T25瓶开始,使用ATCC Vascular Cell Basal Medium加完整Endothelial Cell Growth Kit-VEGF体系,传至新T25瓶。
用已建立、已知分泌鼠IgG的无感染教学杂交瘤细胞,做总IgG分泌ELISpot小试。
用玻璃复合电极台式pH计测30 mL普通教学磷酸盐缓冲液,预计pH5–7。
一块1 mm厚迷你SDS-PAGE凝胶,含普通无害蛋白标准及低量教学蛋白;各浴液50 mL完全覆盖凝胶。
从已合规取得、固定包埋并贴附的4–5 μm石蜡教学切片开始,每批2张实验片加1张已知正常形态质控片。
用已提供、非感染性的鼠抗OVA教学抗体样本S及阴性同种属IgG样本N,均已在PBS中;不采血、不免疫动物。
从回收漂浮细胞、配含钙结合液,到流式补偿、象限判读和凋亡率计算,逐项带你完成。
学习温和固定、去乙醇、线性DNA采集、排除双联体,以及G1/S/G2-M直方图的正确读法。
以约100万贴壁细胞为例,按相分离、RNA沉淀、乙醇洗涤和重溶逐步操作并防RNase污染。