细胞实验入门
第一次进细胞房：配 100 mL 完全培养基并给 HeLa 换液
以 ATCC HeLa CCL-2 为明确示例，从培养基配比、柜内摆放到一瓶 T25 的实际换液，逐项写清用量和终点。
首次准备约 45–60 分钟；次日观察 5 分钟
从第一次配液，到独立完成实验
实验怎么做？
从这一步开始。
用量配清楚，时间写明白，操作拆成每一步。
细胞、分子、动物实验，还有图解与实用文档。
YOUR FIRST EXPERIMENT先知道加多少，
先知道加多少，
再知道下一步做什么。
01核对体系02照表配液03逐步操作04检查结果
每篇都从适用条件开始，配套用量、时间和记录。
细胞实验
30 篇指南细胞实验入门
HeLa CCL-2 贴壁传代：一瓶 T75 分成三瓶的完整例子
固定使用 ATCC HeLa CCL-2 和 T75，写清 PBS 清洗、2 mL 胰酶解离、8 mL 培养基终止及 1:3 分装体积。
实际操作约 35–50 分钟；次日检查贴壁
细胞实验入门
台盼蓝与血球计数板：从 20 µL 样本算到实际接种量
以标准改良 Neubauer 计数板与0.4%台盼蓝为例，给出双侧原始格数、稀释倍数、活率与配制5 mL接种悬液的完整计算。
准备约10分钟；每份染色样本2–5分钟内计数
细胞实验进阶
HeLa CCL-2 冻存：5% DMSO 配方、每管细胞数和入库记录
以4支1 mL HeLa冻存管为例，给出95%完全培养基+5%DMSO的真实配方、2×10⁶活细胞/mL计算、降温与复苏质控。
收获及分装约60分钟；受控降温至少24小时；入库后抽管复苏
细胞实验入门
HeLa CCL-2 复苏：一管 1 mL 细胞到 T25 的定量步骤
按ATCC CCL-2产品页采用37°C约2分钟解冻、9 mL完全培养基稀释和200×g 10分钟离心，并写清最终5 mL接种量与首次换液。
准备约25分钟；解冻至接种约20分钟；跟踪72小时
细胞实验入门
Dojindo CK04 CCK-8：5000细胞铺板、10 µL显色和450 nm计算
明确使用Dojindo CK04，以HeLa三种血清条件的教学比较写出板图、100 µL体系、10 µL试剂、2小时读数、匹配空白和完整演算。
先做线性预实验约3天；正式铺板至读数约50小时
细胞实验入门
HeLa 划痕入门：24孔板铺多少、怎么洗、同一视野怎么拍
提供24孔板的教学起始密度、500 µL培养体系、200 µL枪头划痕、两次温和洗涤、0/6/12/24小时定位成像及面积闭合计算。
铺板约1–2天；划痕与0小时拍照约45分钟；随访24小时
细胞实验进阶
肿瘤细胞 Transwell 迁移：8 µm 小室从接种到膜下计数
固定HeLa CCL-2与Corning 3422，明确上下室100/600 µL、每室5万活细胞及固定染色和膜下计数。
准备约1小时；迁移候选窗口24小时；染色计数约1小时
细胞实验进阶
Matrigel Transwell 侵袭：包胶与无胶配对怎样做
以Corning354234基质胶和3422小室为例，示范每膜30µg包被、批次浓度换算及无胶迁移配对。
前夜4°C融胶；包被约1小时；跨胶观察候选24小时
细胞实验需培训
Annexin V/PI 凋亡流式：漂浮细胞、单染补偿和四象限
固定Invitrogen V13241 Alexa Fluor488/PI体系，配1×结合液与100µg/mL PI，完整回收漂浮及贴壁细胞。
收集约30分钟；染色15分钟；当天尽快上机
细胞实验需培训
PI 细胞周期：70%乙醇固定、RNase染色和单细胞门
固定Invitrogen FxCycle F10797体系，每份约100万细胞用500µL即用PI/RNase液，区分DNA倍量与真正周期变化。
收集约30分钟；−20°C固定至少2小时；染色30分钟
细胞实验进阶
EdU 增殖成像：10µM脉冲、Click反应与阳性核计数
使用Invitrogen Click-iT C10337，说明10mM母液、20µM双倍工作液、Click混合次序及EdU阳性核比例。
铺板过夜；EdU脉冲2小时；固定染色约2小时