分子实验进阶
大肠杆菌电转化：100 mL培养物与0.1 cm电击杯
以低盐洗涤、即时复苏、实测脉冲与完整质粒对照完成普通克隆转化。
约2天
从第一次配液，到独立完成实验
实验怎么做？
从这一步开始。
用量配清楚，时间写明白，操作拆成每一步。
细胞、分子、动物实验，还有图解与实用文档。
YOUR FIRST EXPERIMENT先知道加多少，
先知道加多少，
再知道下一步做什么。
01核对体系02照表配液03逐步操作04检查结果
每篇都从适用条件开始，配套用量、时间和记录。
全部实验方法
141 篇指南分子实验入门
蓝白筛选与重组克隆验证：8个候选的PCR、酶切和测序
把白色候选与真正序列正确的克隆分开判定，使用空载体、无模板和已知插入对照。
约3–5天
分子实验进阶
酿酒酵母电转：EBY100的LiAc/DTT预处理与质粒转化
固定100 mL培养、200 μL细胞和2 mm杯，使用现代已核方案替代旧文混杂参数。
约5–7天
分子实验进阶
毕赤酵母电转：pPICZ线性化教学质粒的整合与筛选
明确GS115、500 mL感受态制备、2 mm电击和YPDS选择，避免把高抗性直接当高表达。
约1–2周
分子实验进阶
酵母Cre-loxP敲除与标记回收：HO教学位点的两阶段验证
以已验证敲除片段开始，分开检查基因替换、G418标记移除与Cre质粒清除。
约2–3周
分子实验进阶
DpnI定点突变：4 kb无害教学质粒的全质粒扩增与测序
以dam⁺模板、明确Pfu体系和DpnI消化建立点突变，设置无引物背景对照。
约4–5天
分子实验进阶
非放射性Southern杂交：DIG探针检测3 kb教学DNA片段
用毛细转膜、DIG免疫检测和阳阴性教学片段练习完整Southern路线。
约3天
分子实验进阶
酚胍法总RNA提取：一皿培养细胞的分相、沉淀与洗涤
固定1 mL TRIzol规模，以水相转移和实测RNA质量控制分相污染。
约90分钟
分子实验进阶
oligo(dT)纯化mRNA：生物素寡聚dT与链霉亲和素磁分离
以200 μg总RNA完成poly(A)富集，明确与旧纤维素柱路线的替换关系。
约1小时
细胞实验进阶
合成siRNA转染与验证：24孔板10 nM起始条件
用两条独立siRNA、非靶向与转染对照建立可解释的敲低实验。
约4天；独立验证需多批次
分子实验进阶
非放射性RNase保护实验：生物素反义探针与245 nt保护片段
从10 μg总RNA杂交、RNase消化到变性胶和链霉亲和素化学发光检测。
约2天
分子实验进阶
DIG-LNA小RNA Northern：尿素胶、EDC固定与化学发光
使用5 μg总RNA检测约22 nt小RNA，明确区分旧甲醛长RNA路线。
约2天