细胞实验进阶
克隆形成实验：每孔200个单细胞到铺板效率和存活分数
以HeLa六孔板200细胞/2mL为候选，写出两级稀释、换液、≥50细胞集落规则与PE/SF计算。
铺板约45分钟；培养约10–14天；固定计数约1小时
从第一次配液，到独立完成实验
实验怎么做？
从这一步开始。
用量配清楚，时间写明白，操作拆成每一步。
细胞、分子、动物实验，还有图解与实用文档。
YOUR FIRST EXPERIMENT先知道加多少，
先知道加多少，
再知道下一步做什么。
01核对体系02照表配液03逐步操作04检查结果
每篇都从适用条件开始，配套用量、时间和记录。
细胞实验
30 篇指南细胞实验入门
Calcein-AM/PI 活死染色：300µL悬液双染与逐细胞计数
固定Dojindo CS01双染试剂，用200µL细胞加100µL染液，给出真实染液加和、阴阳性对照与活细胞比例。
收集洗涤约30分钟；37°C染15分钟；立即成像
细胞实验进阶
JC-1 线粒体膜电位：2µM染色与红绿比值
固定Dojindo MT09，用2mM母液配2µM工作液，说明相同曝光、CCCP控制及去极化后不再洗涤。
铺板过夜；染色30分钟；去极化控制约20分钟；立即成像
细胞实验进阶
DCFH-DA 类细胞ROS：探针加载、过氧化氢控制与归一化
固定Dojindo R252改进DCFH-DA体系，明确1:1000加载、黑板100µL体系、100µM H₂O₂控制与活细胞量校正。
铺板约24小时；加载30分钟；控制处理30分钟；立即读数
细胞实验进阶
低黏附三维肿瘤球：2000细胞/孔与半量换液
使用Corning4515圆底低黏附板，给出2000细胞/100µL候选、150×g聚集、50µL半换液及球形态记录。
接种约30分钟；聚集观察24–72小时；培养至第7天
细胞实验进阶
细胞黏附实验：纤连蛋白包被与60分钟洗后保留量
固定Corning356008纤连蛋白，96孔板每孔0.5µg包被，比较洗后黏附细胞及相对保留量。
包被1小时；封闭30分钟；黏附60分钟；固定染色约1小时
细胞实验进阶
SA-β-gal 衰老染色：IMR-90、pH6.0与无CO₂显色
固定ATCC IMR-90与CST9860，配1mL含1mg/mL X-gal的显色液，37°C无CO₂过夜并统计蓝色细胞。
若做应激候选先处理2小时并恢复5天；固定15分钟；显色过夜
细胞实验进阶
Caspase-3/7 活性：白板等体积发光法与背景扣除
固定Promega G8091与白色96孔板，100µL样本加100µL试剂，给出阳性候选、1小时读数和细胞数校正。
铺板过夜；阳性候选4小时；室温平衡约30分钟；反应1小时
细胞实验进阶
合成siRNA转染与验证：24孔板10 nM起始条件
用两条独立siRNA、非靶向与转染对照建立可解释的敲低实验。
约4天；独立验证需多批次
细胞实验进阶
DIG-LNA固定切片RNA原位杂交：显色与竞争对照
以已取得的固定冷冻切片检测短RNA，记录空间定位及特异性控制。
约3天
细胞实验进阶
固定染色体FISH：直接荧光探针与常规玻片路线
使用已制备中期分裂相玻片，完成变性、杂交和匹配对照判读。
约2天
细胞实验入门
非病毒质粒脂质体转染：24孔板双剂量优化
以无支原体的NIH/3T3普通培养细胞及已测序的非病毒GFP教学质粒为例，24孔板每孔0.5 mL培养液；两档脂质体各做2孔，并设未处理及无DNA脂质体对照各2孔，共8孔。
3天