分子实验入门
蛋白透析换液：1 mL可溶蛋白的三次外液置换
1.00 mL、约1 mg/mL的可溶His-GFP（约27 kDa），原液含250 mM咪唑、50 mM Tris和300 mM NaCl。
约18小时
从第一次配液，到独立完成实验
实验怎么做？
从这一步开始。
用量配清楚，时间写明白，操作拆成每一步。
细胞、分子、动物实验，还有图解与实用文档。
YOUR FIRST EXPERIMENT先知道加多少，
先知道加多少，
再知道下一步做什么。
01核对体系02照表配液03逐步操作04检查结果
每篇都从适用条件开始，配套用量、时间和记录。
分子实验
73 篇指南分子实验入门
超滤浓缩与回收核验：4 mL GFP浓缩至0.5 mL
4.00 mL无害纯化GFP，0.20 mg/mL，在20 mM Tris-HCl pH8.0、150 mM NaCl中；用4 mL容量、10 kDa MWCO再生纤维素离心超滤器和摆桶转子浓缩至约0.50 mL。
约1小时
分子实验入门
蛋白胶点切取与质谱交接：角蛋白污染控制
从一块已完成考马斯染色并用水脱色的1 mm厚SDS-PAGE/二维胶开始，选择3个清晰蛋白点或条带，以及1个等面积无蛋白背景胶块；样本来自无害教学蛋白。
约45分钟
分子实验进阶
手灌SDS-PAGE胶：10%分离胶与4%积层胶
为1 mm厚、约8×7 cm迷你垂直电泳板手灌一块10%分离胶及4%积层胶，分别配5 mL与2 mL（含余量）；以无害教学蛋白和分子量标准验证成胶及泳道。
约2小时
分子实验进阶
IEF与二维蛋白电泳：7 cm IPG胶条的受限教学路线
从已去盐、已定量且无颗粒的木豆叶教学蛋白提取物50 μg开始，使用7 cm、pH4–7的IPG胶条及兼容PROTEAN i12聚焦装置，二向为12%迷你SDS-PAGE。
约2天
分子实验进阶
蛋白凝胶银染：单一硝酸银短程体系
一块1 mm厚迷你SDS-PAGE凝胶，含普通无害蛋白标准及低量教学蛋白；各浴液50 mL完全覆盖凝胶。
约3小时
分子实验进阶
间接ELISA抗体滴度：非感染性抗OVA样本倍比稀释
用已提供、非感染性的鼠抗OVA教学抗体样本S及阴性同种属IgG样本N，均已在PBS中；不采血、不免疫动物。
约2天
分子实验入门
新手带教｜贴壁细胞 TRIzol 提取总 RNA
以约100万贴壁细胞为例，按相分离、RNA沉淀、乙醇洗涤和重溶逐步操作并防RNase污染。
约2.5小时
分子实验入门
新手带教｜RNA定量、纯度与完整性检查
学会用RNA HS荧光定量、理解UV纯度比值与完整性读数，并决定样本能否进入RT。
约45–75分钟
分子实验入门
新手带教｜总 RNA 逆转录制备 cDNA（含 No-RT）
按20 μL体系逐管配制RT与No-RT对照，正确编程25/37/85°C并计算cDNA等效输入。
约3小时
分子实验入门
新手带教｜ABI 7500 两步法 SYBR qPCR 上板与设置
指定Power SYBR标准体系，手把手规划96孔板、配置20 μL反应、设定ABI 7500并检查熔解曲线。
约2–3小时
分子实验入门
新手带教｜qPCR四倍稀释标准曲线与扩增效率
逐管配五点四倍系列稀释，布置复孔与NTC，手算斜率、扩增效率和R²的含义及局限。
约3小时