超滤浓缩与回收核验：4 mL GFP浓缩至0.5 mL

02实验原理

水和小分子透膜，蛋白在上室浓缩；膜吸附、漏过和聚集可能损失样本，因此同时定量原样、保留液及滤液。MWCO不是精确分子量过滤器；超滤浓缩不改变可自由透膜盐的浓度，不能当作单次脱盐。

04材料与仪器

4 mL样本、10 kDa 4 mL超滤器、匹配收集管、基液、冷冻摆桶离心机、P200/P1000、低吸附管、兼容蛋白定量与GFP荧光检测设备。

05配液与用量

06时间安排

07开始前的准备

核对本例4 mL再生纤维素器在摆桶4000×g的适配与额定限值；型号无该许可则停止并重建参数。采输入定量另留份，主输入保持4.00 mL。膜若有甘油等保存剂，需要基液预洗；如装置技术文件规定特殊冲洗以文件为准并写入记录，不能擅用乙醇。

08逐步操作

1. 记录GFP输入体积4.00 mL、浓度0.20 mg/mL、总质量0.80 mg及基液。
2. 核实超滤器10 kDa、4 mL容量、摆桶适配与4000×g许可，检查膜及塑料无裂纹。
3. 向上室加4 mL基液，对称配平，4000×g、4°C预洗约10分钟；收集液与样本滤液分开。
4. 移去残余预洗液，保持膜湿润；把4.00 mL样本加入上室，标记收集管F1。
5. 盖紧并质量配平，装入正确方向，4000×g、4°C离心10分钟，完全停转后取出。
6. 观察上室体积及是否有聚集，轻轻混匀保留液，避免只取浓度梯度最上层。
7. 再次以5–10分钟分段离心，接近1 mL时改每5分钟检查，所有滤液保留并量体积。
8. 当上室约0.50 mL时停止；若已低于目标体积，用少量基液恢复并记录新增量。
9. 用移液器沿上室底侧轻柔吸排混匀，从规定回收位置取液至低吸附管；不得用枪头刮膜。
10. 量实际保留液体积，另以少量已量取基液冲洗上室回收残留，若合并则计入最终总体积。
11. 量总滤液体积，测原样、保留液及滤液的蛋白/GFP信号，全部用同批基液空白。
12. 计算保留液质量回收、滤液蛋白质量及未解释损失，比较体积浓缩倍数与实测浓度倍数。
13. 检查聚集与荧光保留情况；合格样本标浓度、体积、缓冲和日期，短期4°C保存。

09结果判断与质控

若实测0.50 mL、1.20 mg/mL，则回收0.60 mg、质量回收75%，浓度倍数6，不能因体积变8倍就报告8倍浓缩回收。滤液有显著GFP说明截留、膜损坏或不适配，应停止放大。

10实验记录模板

11常见问题与排错

通量慢：查膜污染、聚集与黏度，不能超过额定×g。蛋白低回收：定量滤液及冲洗液，区分漏过与吸附。体积变小但浓度没增：查采样混匀、检测范围和聚集，不能只看液面。

12参考资料

旧来源：网络手册物理172–173页。现代核对：University of Pittsburgh/Johns Hopkins University，BG4 antibody can recognize telomeric G-quadruplexes harboring destabilizing base modifications and lesions，2024公开技术方法，实际核对4 mL、10 kDa离心超滤器浓缩及加缓冲再浓缩；另核对EMBL PEPCF Protein purification的质量控制，查阅2026-11-02。该文未给本器的离心力，不能据此验证转速。4 mL/10 kDa、摆桶4000×g为本篇限定设备条件，执行前须留存对应器具有效技术文件；未验证型号不能直接套用。旧Diaflo膜表不能代替现用离心器参数。