蛋白胶点切取与质谱交接：角蛋白污染控制

02实验原理

把目标凝胶区域转移至洁净管，供平台胶内酶解与质谱；角蛋白、BSA及相邻蛋白会与目标一起进入谱图。必须保存整胶图、坐标与空白胶块，单个点也可能包含多种蛋白。

04材料与仪器

已染色凝胶、洁净玻璃板/新培养皿、全新锋利刀片、镊子、低蛋白吸附聚丙烯1.5 mL管4支、质谱级水、少量新鲜高纯甲醇、成像设备、平台样本登记表；只在已确认兼容的考马斯染色体系取样。

05配液与用量

不向交接管加入BSA、甘油、SDS上样液或保存防腐剂。本文使用Yale Keck明确建议的“无外加缓冲液/溶剂”交接；若实际平台要求不同，先获得其书面接收条件再开始切胶。

06时间安排

07开始前的准备

先确认接收平台接受考马斯染色凝胶、是否接受银染、保存温度、是否要求湿胶及背景胶块。此处固定选择Yale Keck接收描述的无外加溶剂管装方式；不能把旧文−80°C/冻干当所有平台通用规范。准备清晰全胶原图和目标坐标。

08逐步操作

1. 联系已授权的平台接收流程，仅取得技术接收规范与表单，不提交任何未经授权样本；记录可接受染色与保存条件。
2. 清洁低人流操作台，换无粉手套、干净实验服和发帽，备4支标记管。
3. 用洁净甲醇短暂润洗镊子和玻璃面，待挥发，再用质谱级水冲净接触胶的表面。
4. 用独立洁净甲醇预洗空管，弃洗液并使其无可见残液；加盖防尘，不把公共洗瓶液倒回。
5. 将凝胶转入新培养皿，用50 mL质谱级水轻摇5分钟，换新水再洗5分钟。
6. 在干净背景拍全胶图，记录酸性/碱性端、分子量标准、胶角标记及预定目标编号P1–P3。
7. 把目标编号及坐标标在图像副本，保存原图；不可用记号笔直接在目标胶面标记。
8. 将胶转到水润湿的洁净玻璃面，吸去多余水但不使胶干硬，露出待切区域。
9. 用新刀片围绕P1切取最小包含目标的矩形，约1–5 mm宽；避开相邻条带，不刮取玻璃碎片。
10. 用清洁镊子将P1轻放入对应管，加盖；P2/P3之间清洁器具或更换刀片，避免带入上一个胶块。
11. 在同胶无可见蛋白区域切等面积背景块B，与样本同工具清洁条件装管。
12. 再次拍摄切后整胶，核对每个缺口与管号；记录胶块尺寸、样本种属、预期蛋白及染色试剂体系。
13. 按已确认路线无外加液体当日密封交接，附原图、坐标、空白与样本表；若延迟，先核实平台保存条件再冷藏/冷冻。

09结果判断与质控

每管应能追溯到全胶唯一位置，切后图与切前图匹配。交接表需注明任何银染、还原剂及化学修饰，不把质谱鉴定当作单点纯度的保证。无明确接收规范时先暂停交接，已切样本按本地平台指导保护。

10实验记录模板

11常见问题与排错

目标与相邻点重叠：缩小取样或回到分离阶段，不靠质谱软件保证解混。角蛋白高：检查衣物、扬尘、共用容器与手套，参考背景块。目标找不到：复核凝胶方向和坐标，不能凭记忆补写编号。

12参考资料

旧来源：网络手册物理192页，短版44–45页。现代核对：Yale School of Medicine，Keck Biotechnology Resource Laboratory，Application Note 1: Reduction of keratin levels for in-gel digestion and LC-MS/MS analysis，未标日期，查阅2026-11-02。采用低尘切胶、洁净刀片/镊子、1–5 mm宽胶条、聚丙烯管及无外加缓冲/溶剂交接；不采用旧文剪枪头切取、统一−80°C或冻干。