分子实验进阶
反向PCR：教学DNA限制片段的稀释自连接与接头验证
在已知无害教学DNA上演练限制片段环化、背向引物扩增和接头测序。
约1天
从第一次配液，到独立完成实验
实验怎么做？
从这一步开始。
用量配清楚，时间写明白，操作拆成每一步。
细胞、分子、动物实验，还有图解与实用文档。
YOUR FIRST EXPERIMENT先知道加多少，
先知道加多少，
再知道下一步做什么。
01核对体系02照表配液03逐步操作04检查结果
每篇都从适用条件开始，配套用量、时间和记录。
分子实验
73 篇指南分子实验进阶
酿酒酵母菌落PCR：NaOH热裂解后筛查教学位点
对BSL1酿酒酵母单菌落先保种，再做碱热裂解和有对照的PCR；区分裂解失败与靶标阴性。
约3小时
分子实验进阶
重叠延伸SOE-PCR：600与800 bp教学片段融合
通过24 bp重叠区、等摩尔模板、无引物延伸和外侧引物扩增获得1376 bp融合片段。
约5–6小时
分子实验进阶
PCR-SSCP构象筛查：150 bp教学片段的非放射性PAGE
以已测序等长教学变体和参考片段，在两种甘油条件下比较单链构象，使用SYBR Gold显影。
约1天
分子实验进阶
传统碱裂解质粒小提：1.5 mL菌液的无柱路线
用100/200/150 μL三液体系中和裂解，再经RNase、酚氯仿与醇沉淀回收质粒。
约2小时，培养另过夜
分子实验进阶
加A尾与TA克隆：1 kb教学平端DNA接入pGEM-T
先以普通Taq补加3′A，再在指定T载体体系中连接、转化、筛查并测序。
操作约4小时，加培养与测序2–3天
分子实验进阶
双酶切定向亚克隆：EcoRI/HindIII的1 kb教学插入
从已知供体和受体图谱出发，完成双酶切、片段分离、定量连接及有对照的克隆验证。
操作约6小时，加培养与测序2–3天
分子实验入门
大肠杆菌化学感受态制备与热激转化：50 mL DH5α教学批次
从对数期培养、低温CaCl₂处理到带阴阳性对照的热激转化和效率计算。
约2天
分子实验进阶
大肠杆菌电转化：100 mL培养物与0.1 cm电击杯
以低盐洗涤、即时复苏、实测脉冲与完整质粒对照完成普通克隆转化。
约2天
分子实验入门
蓝白筛选与重组克隆验证：8个候选的PCR、酶切和测序
把白色候选与真正序列正确的克隆分开判定，使用空载体、无模板和已知插入对照。
约3–5天
分子实验进阶
酿酒酵母电转：EBY100的LiAc/DTT预处理与质粒转化
固定100 mL培养、200 μL细胞和2 mm杯，使用现代已核方案替代旧文混杂参数。
约5–7天
分子实验进阶
毕赤酵母电转：pPICZ线性化教学质粒的整合与筛选
明确GS115、500 mL感受态制备、2 mm电击和YPDS选择，避免把高抗性直接当高表达。
约1–2周