01本篇适用条件
用于普通纯化非感染性DNA的缓冲液配制，固定为100 mL 1 M Tris-HCl pH8.0、100 mL 0.5 M EDTA pH8.0和100 mL 1×TE。Tris从Tris base配起，EDTA从乙二胺四乙酸二钠二水合物配起。TE含1 mM EDTA，适合常规DNA保存，但不自动适合所有需Mg²⁺的酶反应；不作为RNA无核酸酶等级保证。
02实验原理
Tris经盐酸调pH形成缓冲体系；其pH受温度影响，应在记录的室温测定。EDTA二钠在接近pH8时更易溶解，不能把未溶白粉简单滤掉而仍标0.5 M。两种母液分别合格后按稀释关系配TE。
03安全与适用范围
NaOH及HCl有腐蚀性，酸碱中和可放热；戴手套、实验服和护目镜，在通风橱由受训人员加酸碱。首次使用者优先用现成合格母液完成TE配制，其余步骤在指导下完成。小量逐步加碱，容器不密闭，不把灼热液放入定容瓶。
04材料与仪器
- Tris base分子量121.14；EDTA-Na₂·2H₂O分子量372.24；纯水及标签清楚的现成1 M HCl、5 M NaOH。
- 适用于Tris测量的pH电极，pH7与pH10校准液，温度计、搅拌器、耐化学品烧杯。
- 读数到0.001 g的天平、100 mL定容容器、P200/P1000与量取酸碱工具、洁净带盖瓶；需无菌液时备经确认适用的0.22 μm滤器。
05配液与用量
| 液体 | 100 mL配方 | 关键定义 |
|---|---|---|
| 1 M Tris-HCl pH8.0 | Tris base12.114 g，水先约60 mL，以1 M HCl逐步调pH8.0，最后水至100 mL | 不用12.191 g；酸量由实测pH决定 |
| 0.5 M EDTA pH8.0 | EDTA二钠二水盐18.612 g，水先约60 mL，以5 M NaOH逐步调pH8.0并溶清，最后水至100 mL | 无水盐质量不同，不能互换 |
| 1×TE pH8.0 | 1 M Tris-HCl pH8.0 1.00 mL，0.5 M EDTA pH8.0 0.200 mL，水补至100 mL | 10 mM Tris、1 mM EDTA |
| 不含EDTA的对照保存液 | 1 M Tris-HCl pH8.0 1.00 mL，水补至100 mL | 10 mM Tris；后续酶体系可优先考虑 |
酸碱不是固定配方体积，不写“加若干毫升必然到pH8.0”。若液体体积已接近100 mL仍未调好或未溶清，停下重配或选择较浓且已知浓度的酸碱由受训者处理，不能超体积后仍标原浓度。
06时间安排
| 阶段 | 条件 | 时间/完成标志 |
|---|---|---|
| 校准、称量 | 室温 | 15分钟 |
| Tris溶解和调pH | 室温搅拌 | 15–25分钟 |
| EDTA逐步加碱溶解 | 室温搅拌 | 20–40分钟至澄清 |
| 回温定容、配TE及核验 | 室温 | 20分钟 |
07开始前的准备
检查盐型和分子量，把0.5 M×0.1 L×372.24 g/mol=18.612 g写入记录。用适当pH7/10标准校准电极，记录校准斜率和温度；只用pH试纸不能承担最终精确调pH。每种母液各保留独立容器，工作期间控制总体积，待完全回室温后才最终校正pH和定容。
08逐步操作
- 标记Tris、EDTA、TE和不含EDTA对照四只瓶，写目标浓度及pH8.0；确认原料标签不是Tris-HCl粉末或EDTA游离酸。
- 按仪器要求用pH7和pH10液校准，冲洗电极并吸去外壁水滴，记录室温；不擦刮玻璃球泡。
- 称12.114 g Tris base入烧杯，加约60 mL水，搅拌至完全无颗粒。
- 测pH，分次加入现成1 M HCl，边搅拌边等待稳定；接近8.0时逐滴加入，并记录累计用量。
- 将Tris溶液回到记录的室温，确认pH8.0后转入定容容器，用少量水洗烧杯并合并，补至100 mL后混匀。
- 另称18.612 g EDTA二钠二水盐，加约60 mL水搅拌；初期不完全溶解属于预期，不把白粉滤除。
- 分次缓慢加入5 M NaOH，每次混匀后观察溶解和pH，接近pH8时减小加量；避免局部强碱飞溅。
- EDTA澄清并回室温后最终调到pH8.0，转移并水洗容器，将总量补至100 mL，充分混匀，另取小份复测pH。
- 在TE定容容器先放约80 mL水，加入1.00 mL Tris母液和0.200 mL EDTA母液；分别勾选来源瓶。
- 用水补至100 mL，盖紧颠倒10次，取小份测室温pH并记录；小份测液不倒回。
- 另配100 mL不含EDTA的10 mM Tris对照，标签明显区分；做DNA后续酶反应时计算实际EDTA带入量。
- 若本次用途要求无菌，使用经确认适用的0.22 μm滤器分别过滤并收集到洁净瓶，标明处理方式；过滤不能证明无DNase或RNase。
- 以洁净10 mM Tris及TE分别配相同小份商业教学DNA，在本次使用时核对溶解和检测空白；没有长期稳定性试验不宣称保质期已验证。
- 写瓶签浓度、盐型、pH/测温、配制和处理日期、操作者；洁净室温加盖保存，使用前查浑浊和污染，DNA本身按项目冷藏或冷冻。
09结果判断与质控
三个目标液应澄清，室温pH在本次预设8.0±0.1教学范围内，配液记录可复算。TE中EDTA不是“越多越保护”；例如反应中带入2 μL TE至20 μL时EDTA为0.1 mM，须结合所用酶的Mg²⁺条件评估。外观澄清不能证明无核酸酶，样本关键用途需专门等级和验证。
10实验记录模板
| 液名/批次 | 原料/盐型/质量g | 起始水mL | HCl或NaOH浓度/累计mL | pH/温度 | 定容mL | 过滤方式 | 配制人 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 待填 | 待填 | 约60或80 | 待填 | 待填 | 100 | 待填 | 待填 |
| TE所用Tris批次/体积 | EDTA批次/体积 | 最终浓度复核 | 对照及空白记录 | 异常处理 |
|---|---|---|---|---|
| 待填/1 mL | 待填/0.2 mL | 10/1 mM | 待填 | 待填 |
11常见问题与排错
EDTA始终有白粉
核实是否二钠二水盐、pH与加碱方法；若接近终体积仍无法溶清，重配，不先定容再大量加碱。
pH隔天变化
查温度差、校准、污染和是否充分混匀；重新在同温测定，不直接沿用热液或冷液读数。
DNA酶反应受抑
核算EDTA带入浓度，使用不含EDTA的Tris重新纯化或稀释DNA并验证，不擅自向酶反应补未知量Mg²⁺。
12参考资料
- 用户提供《分子生物学实验方法 老文档 仅供参考》PDF物理第55、58页；《分子生物学实验手册 来源网络仅供参考》PDF物理第225、227页：TE定义与EDTA溶解线索。旧版Tris的121.91 g/L已按121.14 g/mol纠正，不采用含酚TBS配方。
- Promega，DNA Purification技术指南（Elution），查阅日期2026-11-02：核对TE的DNA保存用途、EDTA与下游Mg²⁺反应的兼容性边界；本篇母液质量依据明确盐型分子量及物质的量守恒复算，酸碱体积以实测pH决定。
做完最后一步，再核对原始记录。填写实际用量、起止时间与观察结果；遇到异常，先记录，再查看排错说明。