01本篇适用条件
用于普通非感染性DNA琼脂糖电泳的缓冲液配制练习，制备100 mL 50×TAE或100 mL 5×TBE，再各取一份稀释为500 mL工作液。两种液体分瓶配制；本例TAE工作浓度1×、TBE工作浓度0.5×。不包含核酸染料、碱性电泳液、脉冲场优化或SDS-PAGE跑胶液。
02实验原理
Tris与乙酸或硼酸组成缓冲体系，EDTA螯合金属离子。工作液倍数由浓缩液定义及稀释体积共同决定；5×TBE稀释10倍得到0.5×，不是1×。TAE与TBE不能按相同瓶盖数混配，胶内和槽内应使用同一体系与浓度。
03安全与适用范围
称粉及酸碱操作戴手套、实验服和护目镜；硼酸避免扬尘，按SDS管理。冰乙酸有腐蚀性和刺激性，在通风橱由已受训人员量取，缓慢加入水相，远离热源；首次操作者由指导者陪同，或使用明确浓度的现成50×TAE。禁止口吸移液。
04材料与仪器
- Tris base（分子量121.14）、冰乙酸、硼酸（分子量61.83）、已标定0.5 M EDTA pH8.0和实验级纯水。
- 0.01 g读数天平、称量舟、搅拌器、耐化学品烧杯、100 mL及500 mL定容容器、带盖储液瓶。
- 适合Tris的pH电极及pH7/10校准液、温度计、量筒或配套移液工具；不以量杯刻线代替精确定容。
05配液与用量
| 液体 | 100 mL浓缩液配方 | 标准工作液 |
|---|---|---|
| 50×TAE | Tris base24.20 g、冰乙酸5.71 mL、0.5 M EDTA pH8.0 10.00 mL，水定容100 mL | 1×约40 mM Tris、20 mM乙酸、1 mM EDTA |
| 5×TBE | Tris base5.40 g、硼酸2.75 g、0.5 M EDTA pH8.0 2.00 mL，水定容100 mL | 0.5×约44.5 mM Tris、44.5 mM硼酸、1 mM EDTA |
| 1×TAE 500 mL | 50×TAE10 mL，以水补至500 mL | 稀释50倍 |
| 0.5×TBE 500 mL | 5×TBE50 mL，以水补至500 mL | 稀释10倍 |
上表TBE保留传统四舍五入质量，不追称到虚假的小数精度。原料是Tris碱而不是Tris-HCl粉末；EDTA是0.5 M现成液，不把旧文献中的0.5 mmol/L误当0.5 mol/L。
06时间安排
| 阶段 | 条件 | 时间/终点 |
|---|---|---|
| 核算与称量 | 室温 | 10分钟 |
| 分别溶解 | 室温搅拌 | 15–30分钟至澄清 |
| 回温定容与标记 | 室温 | 10分钟 |
| 稀释与质量检查 | 室温 | 10分钟 |
07开始前的准备
先决定本次配TAE、TBE或两者，分别建立称量清单。核对原料水合物、EDTA浓度和日期，EDTA未完全溶清不得使用。确认50×TAE瓶已有10 mL EDTA，不使用网络旧版物理247页的20 mL/100 mL变体。按C₁V₁=C₂V₂独立复算工作液体积。电泳设备另确认适配工作液，本篇不据缓冲能力推断所有DNA片段的最优分辨条件。
利用箭头辨认电极、胶槽与制胶组件，再按正文核对上样孔朝负极以及DNA迁移方向。图中设备仅为结构示例，不能照搬电源旋钮、尺寸或电压。来源为Addgene技术教程局部图，非商业推广。
08逐步操作
- 在两套洁净容器上分别标50×TAE和5×TBE，准备独立加料表与储液瓶，防止中途混淆。
- 检查天平水平及去皮，称TAE所需Tris24.20 g；另称TBE的Tris5.40 g和硼酸2.75 g，分别记录实际质量。
- 在TAE烧杯先放约60 mL水，加入24.20 g Tris，室温搅拌至基本溶解；不一开始就加100 mL水。
- 由受训人员在通风橱量取5.71 mL冰乙酸，缓慢加入正在搅拌的TAE水相，防止飞溅。
- 向TAE加入10.00 mL 0.5 M EDTA pH8.0，搅拌均匀；待回到室温再转移定容容器。
- 用少量水洗原烧杯，洗液并入；以水补至总量100 mL，盖紧颠倒10次，不是额外再加100 mL水。
- 另在TBE烧杯放约70 mL水，依次加入5.40 g Tris和2.75 g硼酸，室温搅拌至无颗粒。
- 向TBE加2.00 mL 0.5 M EDTA，混匀并回温，转移后以水补至100 mL，盖紧颠倒10次。
- 校准电极，以小份取样测室温pH并记录温度，测后样品不倒回原瓶；常见标准配方约pH8.3，偏离明显时查配方后重配。
- 分取50×TAE10.00 mL到500 mL容器，用水补到500 mL，混匀并标为1×TAE。
- 另分取5×TBE50.00 mL，用水补至500 mL，混匀并标为0.5×TBE。
- 将工作液与已知正确同体系工作液作小胶运行对照，使用同批商业DNA ladder；比较正常迁移、发热及电流，保存批次验证记录。
观察枪头与胶孔的位置；正文上样时避免戳破胶底、漏到缓冲液或挤入相邻孔。照片是原教程示例，不代表本篇样本、上样量或实验结果。来源为Addgene技术教程，非商业推广。
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Addgene原教程第三幅照片：观察运行进度；不凭照片估计DNA片段长度。开盖、触碰胶槽或调整接线前必须先停电并断开电源。
- 给全部瓶签写名称、倍数、EDTA浓度、日期和操作者，室温加盖存放；当日配液教学设置建议工作液现配现用，浓缩液使用前检查澄清。
- 若TBE出现不能完全恢复的沉淀或有污染，停用重配，不只吸上清继续用；整理称量与稀释记录并清洁器具。
09结果判断与质控
浓缩液及工作液应澄清无可见颗粒，配方、体积、瓶签和稀释倍数一致。已知正确液的运行对照用于识别严重配错，pH接近8.3不能独自证明所有组分浓度正确。不同缓冲体系电流本来可不同，不设统一电流阈值；若无功能对照，仅报告完成配制，勿宣称已验证性能。
10实验记录模板
| 批号/液名 | Tris g | 酸mL或硼酸g | EDTA M/mL | 定容mL | pH/温度 | 取原液mL | 工作终体积mL/倍数 | 功能对照图 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 待填 | 待填 | 待填 | 0.5/待填 | 100 | 待填 | 10或50 | 500/待填 | 待填 |
11常见问题与排错
胶和槽用了不同缓冲液
本次运行不能用于可靠比较；重配一致工作液并重新跑胶，不在槽内临时加浓缩液补救。
pH异常或电流过大
复核工作倍数、是否误用Tris-HCl、EDTA体积及定容；不要先用NaOH调到“正常数字”。
TBE析出
检查温度、储存和配方，持续析出液停用；不按旧文档随意提高pH以掩盖沉淀。
12参考资料
- 用户提供《分子生物学实验方法 老文档 仅供参考》PDF物理第59页：标准50×TAE和5×TBE配方线索；《分子生物学实验手册 来源网络仅供参考》PDF物理第247–248页存在TAE倍数、EDTA及TPE抄录冲突，本篇不照搬。
- Addgene，Agarose Gel Electrophoresis，查阅日期2026-11-02：核对1×TAE使用、胶与槽缓冲一致及电泳检查。浓缩液质量按旧版标准配方与分子量/稀释守恒复算；本篇小规模配制和批次对照为教学设置。
做完最后一步，再核对原始记录。填写实际用量、起止时间与观察结果；遇到异常，先记录，再查看排错说明。