01本篇适用条件
仅用于已获批、能安全自由探索的小鼠行为研究，不需禁食或奖励。本例箱体 40×40 cm、10 分钟环境适应、10 分钟物体熟悉、间隔 60 分钟及 5 分钟测试是教学方案，必须经本模型预实验验证；不能视作所有记忆实验的标准延迟。视嗅觉、运动能力、物体固有偏好与重复测试都会影响结果。
02实验原理
熟悉阶段摆两个同型 A 物体，测试阶段以一个新 B 替换其中一个。探索定义为鼻部朝向物体并在预定义距离内嗅探或接触，不包括靠坐、攀爬或路过。辨别指数 DI＝(TN−TF)/(TN+TF)，TN/TF 是新/熟悉物体探索秒数，必须同时报告总探索。
03安全与适用范围
仅供已完成设施准入、相关技能培训且纳入有效伦理批准的人员执行。先核对动物状态、操作范围与批准版本；出现疼痛、受伤、呼吸或活动异常时停止测定并依获批福利路径联系兽医。体重、肿瘤负担及行为触发条件填入本项目获批值，不采用本页数字作为通用人道终点。优先福利，不能为补齐数据延迟处置。
04材料与仪器
- 可清洁、防逃的探索箱、稳定且不可吞咽的 A/B 物体与同型备件。
- 固定摄像系统、场图、计时/事件标注工具和中性文件 ID。
- 物体/侧别平衡表、盲态评分定义及设施认可清洁用品。
05配液与用量
| 物品/设置 | 教学准备 | 验收 |
|---|---|---|
| 探索箱 | 40×40 cm；围壁经防逃评估 | 无异味、反光和锐边 |
| 物体 A/B | 至少同型 A 两件、B 一件及清洁备件 | 大小相近、稳固、不易攀爬倒伏 |
| 摆放图 | 左右对称，示例距后壁 10 cm | 实际坐标固定并拍照 |
| 探索判定 | 鼻朝物体，示例 2 cm 内 | 用录像标尺验证距离规则 |
06时间安排
| 教学阶段 | 时间 | 记录 |
|---|---|---|
| 第 1 天 | 空箱适应 10 min 示例 | 实际暴露与活动状态 |
| 第 2 天熟悉 | 两件 A，10 min 示例 | 各侧探索时间 |
| 保持间隔 | 回原笼 60 min 示例 | 每只实际间隔 |
| 测试 | 一件 A/一件 B，5 min 示例 | 新旧探索逐段事件 |
| 每阶段之后 | 回笼、清洁与完全干燥 | 物体 ID、位置和偏离 |
07开始前的准备
用独立合规预实验验证 A/B 无明显固有偏好、不会倒伏或伤害动物，规定最低总探索与强侧偏处理〔项目验证值〕。平衡新物体身份及替换左/右侧，不能所有处理组总在右边遇到 B。固定 A 是否使用同型清洁副本，避免依赖气味残留识别。
新物体识别的四种示例物体。用于对应物体与场地布局；原文时程仅为来源示例。 所有原图panel、坐标与图例均保留。
新物体识别适应、训练和测试的布局与时间线。用于对应物体与场地布局；原文时程仅为来源示例。 所有原图panel、坐标与图例均保留。
08逐步操作
- 核对动物身份、健康、既往物体/箱体经历与获批排程；感官或运动缺陷按预设规则处理，不根据结果临时排除。
- 固定相机、照明与箱内坐标，试录确认物体附近鼻部动作可见；标定 2 cm 示例距离，不用不明像素阈值直接评分。
- 将物体固定到经验证位置，检查稳定、无小零件及尖角；不能正式测到一半更换为更容易探索的物体。
- 第 1 天按计划进行空箱适应，保持转移和环境一致；记录实际时长、异常及任何中断。
- 第 2 天在固定位置摆两件同型 A，温和转移并从统一起点记录熟悉阶段，按本例观察 10 分钟，不人为引导接近。
- 按盲态规则记录左右探索时间和靠坐/攀爬；低探索或强侧偏标记待按预设标准评估，不能靠延长一次时间“补足”。
- 将动物安全送回原笼，记录熟悉结束与测试开始的实际时间；本例间隔 60 分钟，顺序安排应避免不同组间隔系统不同。
- 按平衡表将一侧替换为 B，另一侧使用预定同型熟悉 A；两者按同一清洁方法处理，位置与方向按场图固定。
- 录像本例测试 5 分钟，记录异常与实际时长；物体倒伏或健康异常按预设规则终止，不扶正后假装连续一次。
- 在隐藏组别的视频中逐段标记鼻部朝向且满足距离的探索，求 TN 与 TF；路过、攀坐和背对接触不计入，保留事件起止时间。
- 纯教学：TN＝30 s、TF＝20 s，则总探索 50 s，DI＝10/50＝0.20，新物体偏好＝30/50×100%＝60%。这些不是参考正常值。
- 分母为零时不可计算，低于项目标准则依计划报告；动物是分析单位，不将多段嗅探当独立重复。报告箱体、物体、位置、延迟、定义和缺失原因。
09结果判断与质控
得到熟悉与测试两阶段探索原始事件、物体/侧别平衡表和每只 DI。正 DI 表示本次对新物体探索更多，但不能单凭正负诊断记忆；总探索、侧偏、物体偏好及环境需要共同审查，示例 0.20 不代表正常阈值。
新物体识别区分指数的剂量相关结果示例。仅解释已发表结果、区分指数和混杂因素；不从图中引入给药或其他干预步骤。 所有原图panel、坐标与图例均保留。
新物体识别不同记忆阶段的区分指数结果示例。仅解释已发表结果、区分指数和混杂因素；不从图中引入给药或其他干预步骤。 所有原图panel、坐标与图例均保留。
小鼠品系和保持间隔对新物体区分指数的影响。仅解释已发表结果、区分指数和混杂因素；不从图中引入给药或其他干预步骤。 所有原图panel、坐标与图例均保留。
10实验记录模板
| 动物/视频 ID | 阶段/物体左右 ID | 实际起止/间隔 | 左/右探索 s | TN/TF/总探索 s | DI/偏好 % | 有效性依据/异常 | 评分者 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 〔填写〕 | 〔填写〕 | 〔填写〕 | 〔逐段求和〕 | 〔计算〕 | 〔计算/不可算〕 | 〔预设条款〕 | 〔填写〕 |
11常见问题与排错
总是偏向一侧
检查照度、摄像机影子、摆放及熟悉阶段侧偏；按预设规则解释并报告，不能测试后把“新物体”身份换边。
动物爬到物体上不下来
说明物体设计或判定不合适，保留原片与无效原因，后续先验证新物体再改方案。
TN/TF 都很小但 DI 很大
小分母导致不稳定，按预设最低探索规则处理；不只报告比值隐藏原始秒数。
12参考资料
- Lueptow，2017：Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice：物体、探索及保持间隔设计；本篇时间与尺寸为教学示例。
- ARRIVE 2.0：设计、随机/盲法、排除和福利报告要求。
做完最后一步，再核对原始记录。填写实际用量、起止时间与观察结果；遇到异常，先记录，再查看排错说明。