石蜡切片H&E染色：从已取得切片到封片

02实验原理

脱蜡复水后苏木精显示细胞核，经分化和返蓝获得清晰蓝紫核；伊红显示胞质和基质粉红色，随后脱水透明封片。染色时间依明确体系与切片而调，每次只调整一种染液时间，不能混用Mayer渐进性和强分化退行路线。

04材料与仪器

实验切片2张、正常质控片1张、玻片架和带盖染缸；二甲苯、100%与95%乙醇、清洁水、完整退行性苏木精/温和分化剂/返蓝液/酒精性伊红试剂体系、兼容二甲苯的中性树胶、盖玻片、显微镜、计时器。

05配液与用量

06时间安排

07开始前的准备

先确认切片已烘片固定于载玻片，无松脱；不得为了“更快”提高烤片温度。Leica基线未指定所有染液化学浓度，本文要求使用本实验室已验证的匹配退行性试剂，不以不明盐酸百分比重配。先染质控片确认3分钟/45秒适配本套染液，再同批染实验片；若未验证体系，先只做质控小试。

08逐步操作

1. 核对三张切片身份、厚度、组织面方向和附着，记录已固定包埋来源与质控片编号。
2. 通风橱中排列染缸并加盖，标二甲苯、100%/95%乙醇、水、苏木精、温和分化、返蓝和伊红。

   

3. 质控片先进入二甲苯第一缸2分钟，再第二缸2分钟，确认切片无可见蜡膜。

   

4. 转入100%乙醇两缸各2分钟，再95%乙醇2分钟，清水洗2分钟，完整复水。

   

5. 入本套退行性苏木精3分钟，清水洗1分钟；不让切片在缸间干燥。

   

   

6. 温和分化剂1分钟，清水洗1分钟；用同一完整体系，不用旧文含义不明“75%盐酸酒精”。
7. 返蓝液1分钟，再清水1分钟，检查核色转蓝紫且结构可辨。

   

   

8. 95%乙醇1分钟，再酒精性伊红45秒，取出后滴去多余液体但不风干。

   

   

9. 转95%乙醇1分钟，再100%乙醇两缸各1分钟，完成脱水，不把含水酒精当无水脱水终点。
10. 二甲苯两缸各2分钟，保持透明；出现乳白说明带水，回到合适乙醇脱水阶段排查。

    

11. 在组织面加适量兼容树胶，盖片一侧先接触后缓缓放下，避免气泡压在组织上。

    

12. 树胶稳定后先低倍检查质控片，再10×/40×看核染质、胞质及基质，确认核蓝紫、胞质粉红且无大面积拒染。

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

13. 质控通过后按同一批试剂与时间处理两张实验片；若需调色，苏木精每次调整30秒或伊红15秒，仅改一种并重新核验。

    

    

    

14. 保存全切片/代表视野图，记录试剂批次、时间和质控结论；标记片号、日期与封片体系，归档干燥避光。

09结果判断与质控

质控核结构清楚、核蓝紫与胞质粉红平衡，组织附着完整，无大面积残蜡、皱折或水雾。H&E只能显示形态，不能凭教学图片做临床诊断。实验片与质控都须记录，不能只选择染色最好的区域宣布整批合格。

10实验记录模板

11常见问题与排错

局部无染：查蜡与脱片。核淡：检查苏木精、分化过度及切片厚度，只改一种参数重做质控。伊红太浅：查水带入及酒精脱色过久。透明发白：查脱水不足，不继续加树胶掩盖。

12参考资料

旧来源：短版物理26–27页，其中H&E主体在27页。现代核对：Leica Biosystems，H&E Staining Overview: A Guide to Best Practices，现行技术指南基线时间表，查阅2026-11-02。采用二甲苯2×2分钟、苏木精3分钟、温和分化/返蓝各1分钟、伊红45秒及逐一调时间原则；替换旧文Mayer染液与含义不明“75%盐酸酒精1–2分钟”混合路线，严格从已取得切片开始。