WB 灰度定量
双击画布上传图片 | 数据仅浏览器本地处理，不上传云端，请放心使用
| 等待计算... |
|---|
气泡热图
Bubble Heatmap Generator
使用手册与建议
从图像获取、定量分析到 SCI 热图生成的全流程指南
第一章：图像规范
- 图片格式选择
- 曝光控制与过曝
- 实验排版建议
第二章：WB 定量
- 图像矫正与网格绘制
- 局部背景扣除 (LBS)
- 数据计算与导出
第三章：热图生成
- 双重归一化逻辑
- 核心映射策略
- 视觉美学调整
第四章：FAQ
- 负值产生的原因
- 气泡消失问题
- 重置与容错
第一章：图像获取与预处理规范
优质的原始图片是准确分析的前提。遵循“垃圾进，垃圾出” (Garbage In, Garbage Out) 原则，请务必重视源文件质量。
图片格式的选择
-
推荐 TIFF (.tif/.tiff)
科研图像的黄金标准。支持无损压缩，能完整保留 16-bit 或 8-bit 灰度信息。本工具内置了专业解析引擎，完美支持。 -
可用 PNG (.png)
无损压缩格式，适合轻量级分析。 -
禁止 JPG/JPEG (.jpg)
JPG 是一种“有损压缩”算法。它会在边缘产生人眼难以察觉但计算机能识别的“伪影”和“噪点”。这些噪点会被算法误判为蛋白信号，严重影响定量准确性。
曝光控制：拒绝“过曝”
什么是过曝？
当条带中心的蛋白信号过强，超出了传感器的检测上限（如灰度值达到 0 或 255），条带中心会变成纯色（死黑或死白），丢失所有层次细节。
第二章：WB 智能灰度定量分析
载入与矫正
双击黑色画布上传图片。如果胶片跑歪了，使用上方的 “旋转矫正” 滑块（±5°）。建议寻找一条参照线（如胶边缘），调整滑块直到参照线水平。
网格化定量策略 (The Grid System)
这是本工具替代传统手工画圈的核心操作。
- 操作： 在画布上拖动鼠标画出一个矩形框，必须包含所有目标条带。
- 留白： 选框边缘至少保留 10-20% 的背景区域，不要贴着条带画（算法需要背景区域计算底噪）。
- 设置： 根据实际情况输入 行数 (Target) 和 列数 (Sample)。系统会自动切割。
背景扣除算法详解 (LBS)
点击 “显示预览”，您会看到红色蒙版。调整 “背景扣除阈值 (Top %)”：
原理： 系统将每个小网格视为独立单元，取网格内最亮的前 N% 像素的均值作为该网格的“背景基线”。
- 胶片干净（背景雪白）： 建议 10% - 15%。取少量极值即可代表基线。
- 胶片较脏（有黑点/不均）： 建议 30% - 50%。扩大采样范围以抵消噪点影响。
- 目标： 调整滑块，使红色蒙版覆盖住条带周围的空白处，但绝不要侵蚀到条带本身。
第三章：SCI 气泡热图生成
从原始灰度到发表级图表，中间需要严谨的数据处理逻辑。
Step A. 双重归一化逻辑 (Normalization)
消除上样量误差。勾选“启用内参归一化”并输入内参行名（如 Actin）。
计算相对表达倍数。勾选“启用对照组归一化”并输入对照列名（如 Ctrl）。
Step B. 核心映射策略 (Scaling Mode)
寻找最大值 (Max)，将其设为最大半径。其他数值按比例缩放：
R = (Value / Max) × Rmax将最小值 (Min) 映射为最小半径，最大值 (Max) 映射为最大半径。
第四章：常见问题 (FAQ)
Q1: 为什么计算结果出现 0 或负数？
原因： 您设置的“背景扣除阈值”过低，或者选框包含的比条带还黑的噪点区域，导致计算出的背景基线低于某些像素点。
解决： 本工具会自动过滤负值。建议适当调高背景阈值，或避开边缘伪影。
Q2: 热图里有些气泡消失了？
原因： 在“Max-Ref”模式下，如果该数值相比最大值太小（例如 0.01 vs 100），计算出的半径小于 1px，浏览器无法渲染。
解决： 尝试切换到“Min-Max”模式，或者增大“最大半径”设置。
Q3: 半径模式 vs 面积模式？
面积模式 (Area)： 推荐 气泡面积与数值成正比。符合统计学直觉。
半径模式 (Radius)： 气泡半径与数值成正比。因为 S=πr²，这会造成视觉上的平方级夸大。仅在需要极强视觉冲击力时使用。
Q4: 参数调乱了怎么办？
点击“数据源”区域右上角的 “重置” 按钮（带有旋转箭头图标）。这将执行“工厂级重置”，将所有数据、颜色、尺寸恢复到系统默认的演示状态。